Ciklodextrin-glikoziltranszferáz fermentációs előállításának léptéknövelése és felhasználása szteviol-glikozidok enzimes biokonverziójához
A Stevia rebaudiana egy dél-amerikai növény melynek levelét diterpenoidok teszik a cukornál is édesebbé, valamint vérnyomás csökkentővé, és koleszterin csökkentővé is. Ezek két fő komponense a szteviozid és a rebaudiozid A. Mivel a szteviozid kellemetlen utóízzel rendelkezik a reb A-hoz képest, viszont mennyisége nagyobb, célszerű a szteviozidot reb A-vá alakítani egy transzglikozilálási enzimes reakcióban.
Ilyen reakciót képes katalizálni a ciklodextrin-glikoziltranszferáz (CGTáz; E.C. 2.4.1.19), amely az α-amiláz enzimcsalád tagja. Ez egy multifunkciós enzim, amely hidrolizálja az α-1,4-es glikozid kötést, valamint ciklizációs reakció mellett összekapcsolási reakciót is katalizál ciklodextrineket eredményezve. A CGTáz enzimet számos Bacillus törzs képes extracelluláris módon előállítani. Ilyen törzsek például a B. subtilis, B. licheniformis, B. coagulans, B. firmus és még számos más baktérium.
Kutatómunkám első lépéseként CGTáz enzim fermentációs előállításával foglalkoztam. Három törzset vizsgáltam impedimetrás készülékben (BacTrac) az enzimtermelés szempontjából, ezek voltak a B. licheniformis DSM13, a B. coagulans DSM1 és a Geobacillus stearothermophilus DSM2313. Kétféle tápközegen hasonlítottam össze a törzseket, az egyik az irodalomban gyakran említett CGTáz termelésre használt Horikoshi II média, a másik pedig egy aminosav szegény szervetlen tápközeg volt.
Második lépésként egy kezdeti léptéknövelést hajtottam végre a B. licheniformis-szal nagyobb mennyiségű enzim előállítás céljából.
Végül a megtermelt enzimoldatokkal transzglikozilálási reakciókat végeztem, majd az eredményeket összehasonlítottam, és statisztikailag értékeltem.
szerző
-
Czinkóczky Réka
Biomérnöki mesterképzési szak, nappali MSc
mesterképzés (MA/MSc)
konzulens
-
Dr. Németh Áron
docens, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék
