Az Stl bakteriális represszor és az E. coli dUTPáz kölcsönhatásának vizsgálata
A dUTPáz enzim kulcsfontosságú szerepet játszik abban, hogy a dUTP hidrolízisének útján megakadályozza az uracil beépülését a DNS láncba. A közelmúltban végzett kutatások feltárták, hogy a Staphylococcus aureus patogenitási szigetének represszora, az Stl fehérje és a baktériumot fertőző φ11 fág dUTPáz enzime között kölcsönhatás van. A szakirodalom és a laboratóriumunkban végzett kutatások tanulsága szerint az Stl fehérje a Mycobacterium tuberculosis, a Drosophila melanogaster és a humán dUTPáz enzimek inhibitoraként is működik [1]. Érdekes módon az Eschericia coli és a Yersinia enterocolitica dUTPáz esetén nem figyelhető meg gátlás, az E. coli esetén azonban sikerült alátámasztanunk, hogy a két fehérje között kölcsönhatás van. A kutatás célja az E. coli dUTPáz és az Stl fehérje közötti kölcsönhatás in vitro vizsgálata, valamint az E. coli dUTPáz érzékenyítése az Stl fehérjére, és a gátlásért felelős kapcsolódási pontok feltérképezése.
Kutatómunkám során a két fehérje közötti interakciós helyek feltérképezéséhez rekombináns dUTPáz fehérjéket állítottam elő, melyek az aktív hely közelében tartalmaztak pontmutációt. Az előállított vad típusú, valamint rekombináns dUTPázok és az Stl közötti kölcsönhatást olyan molekuláris biológiai módszerekkel jellemeztem, mint a natív gélelektroforézis, a steady-state enzimaktivitás mérés, valamint a gélpermeációs kromatográfia. A natív gélelektroforézis és a gélpermeációs kromatográfia egyaránt alátámasztották, hogy a két fehérje között kölcsönhatás van. Egy aktív hely közelében történt glutamin → hisztidin csere hatására az E. coli dUTPáz mintegy 40%-ban gátolhatóvá vált.
[1] Hirmondó R, Szabó JE, Nyíri K, Tarjányi S, Dobrotka P, Tóth J, Vértessy BG. Cross-species inhibition of dUTPase via the Staphylococcal Stl protein perturbs dNTP pool and colony formation in Mycobacterium. DNA Repair (Amst).
szerző
-
Temesváry-Kis Fanni
Biomérnöki alapképzési szak, nappali BSC
alapképzés (BA/BSc)
konzulensek
-
Benedek András
PhD hallgató, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék -
Dr. Vértessy G. Beáta
egyetemi tanár, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék