A maláriaellenes gyógyszercélpont, Plasmodium falciparum foszfolipid bioszintetikus kulcsenzim karakterizálása emlős sejtvonalban
A kiterjedt és aktív kutatások ellenére, a malária továbbra is korunk egyik legfenyegetőbb fertőző betegsége. A multidrogrezisztens Plasmodium törzsek terjedése egyre inkább sürgeti új fehérje célpontok azonosítását és ezek ellen újszerű hatóanyagok fejlesztését. A vörösvértesten belül fejlődő parazita számára elengedhetetlen a fokozott membránszintézis, az újonnan szintetizált membránkomponensek döntő részét pedig a foszfolipidek teszik ki, azon belül is a foszfatidil-kolin molekula. A foszfatidil-kolin de novo szintézisének egyik meghatározó módja eukariótákban az ún. Kennedy-útvonal. A folyamat sebesség-meghatározó lépése a CTP:foszfokolin citidililtranszferás (CCT) enzim által katalizált kolin-foszfát CDP-kolin átalakulás. Így felmerül a foszfatidil-kolin bioszintézisének gátlása a CCT enzimen keresztül, mint újszerű antimaláriás gyógyszer célpont.
A kínai aranyhörcsög petefészek sejtvonalban (CHO-K1) random mutagenezissel kondícionális mutációt hoztak létre, amelynek hatására az endogén CCT aktivitás drasztikusan csökken a restriktív 40°C-os hőmérsékleten. A létrejött mutáns sejtvonal, a CHO-MT58 megfelelő eszköznek lehet a CCT enzim intracelluláris funkciójának vizsgálatára. Korábbi kísérletekben a heterológ módon kifejeztetett Plasmodium falciparum CCT (PfCCT) képes volt komplementálni az endogén CCT-t a CHO-MT58 emlős sejtvonalban, ami alkalmassá teszi az eljárást a fehérje strukturális elemeinek vizsgálatára.
Szakdolgozatom keretein belül célom a pszeudoheterodimert képző PfCCT első, illetve második katalitikus domén menekítési potenciáljának meghatározása FACS eljárás segítségével a mutáns és vad típusú CHO sejtvonalakban. Emellett olyan szerkezeti elemeket szeretnék in silico azonosítani, melyek az emlős és Plasmodium falciparum eredetű CCT-ben különböznek és megvizsgálni azok jelentőségét. A menekítési képesség mellett a PfCCT konstrukciók lokalizációját is szeretném megfigyelni és megállapítani azok sejtorganellum preferenciáját.
szerző
-
Izrael Richard
Biomérnöki alapképzési szak, nappali BSC
alapképzés (BA/BSc)
konzulensek
-
Dr. Vértessy G. Beáta
egyetemi tanár, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék -
Dr. Marton Lívia
tudományos segédmunkatárs, MTA Természettudományi Kutatóközpont Enzimológiai Intézet (külső)