DJ-1 fehérje oxidált variánsainak vizsgálata fordított fázisú folyadékkromatográfiás módszerrel
A DJ-1 fehérje az emberi szervezet szinte minden sejtjében expresszálódik. Fontos szerepet tölt be az oxidatív stressz elleni védelemben, ebből következően az oxidatív stressz által okozott neurodegeneratív betegségekkel szembeni küzdelemben is. Napjainkban közel 10 millió ember szenved Parkinson-kórban, melynek minél korábbi diagnosztizálása, esetleges gyógyítása az orvostudomány egyik égető kérdése. A DJ-1 fehérje vizsgálata ezért kiemelkedően fontos, mivel oxidációjának mértéke összefüggésbe hozható ilyen jellegű betegségek kialakulásával, kulcs szerepet tölthet be a diagnosztizálásban és a gyógyszerjelölt molekulák vizsgálatában is. Vizsgálataink céljául ezért elsősorban a DJ-1 fehérje oxidált variánsainak részletes vizsgálatát tűztük ki.
Munkánk során fordított fázisú folyadékkromatográfiás módszert fejlesztettünk ki a fehérje oxidált variánsainak elválasztására. Megvizsgáltuk a DJ-1 fehérje viselkedését oxidatív körülmények között, az agyban lezajló oxidatív folyamatok modellezésére. H2O2-vel kezeltük a mintákat, és vizsgáltuk az oxidációs folyamatok hatását. A kifejlesztett kromatográfiás módszert tömegspektrometria-kompatibilis módszerré dolgoztuk át, hogy az oxidált variánsokról tömeginformációt is kaphassunk. Ennek során kiváltottuk azt a mozgófázis additívet, mely az MS érzékenységet rontaná. Kromatográfiás méréseink során egymástól jól elváló csúcsokat tapasztaltunk, így elmondható, hogy az általunk használt módszer alkalmas a DJ-1 fehérje különböző oxidációs állapotainak elválasztására, a módszer érzékeny tömegspektrometriás detektálást tesz lehetővé. A folyadékkromatográfiás mérések mellett elvégeztünk kisfelbontású tömegspektrometriás méréseket is, melyek során valószínűsíthetjük, hogy a folyadékkromatográfiás csúcsok valóban különböző mértékben oxidált fehérje variánsok.
Partnerünk a módszer segítségével gyógyszerjelölt molekulák DJ-1 fehérjén kifejtett oxidatív stressz elleni védőfunkcióját vizsgálja.
szerző
-
Hegedüs Eszter
Biomérnöki mesterképzési szak, nappali MSc
mesterképzés (MA/MSc)
konzulensek
-
Dr. Bobály Balázs
adjunktus, Szervetlen és Analitikai Kémia Tanszék -
Dr. Fekete Jenő
, Szervetlen és Analitikai Kémia Tanszék