Homológ rekombináción alapuló géneditálás azonosítására szolgáló marker fejlesztése
Célzott nukleázokkal lehetőségünk nyílik a genom pontos és hatékony módosítására. Ezen munkálatokat a Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) -associated proteinek (Cas) felfedezése rendkívül megkönnyítette, ugyanis használatukhoz elegendő az őket célszekvenciához irányító guide RNS módosítása. Az általuk létrehozott DNS kettősszáltörések kijavítása két fő útvonalon történik, a nem homológ végek összekapcsolásával (NHEJ) és homológ rekombinációval (HR). A NHEJ javítás gyakran pontatlan, inszerciók és deléciók keletkezésével jár(, ezáltal használható knockout módosításokhoz). HR esetén pedig a törés környezetével megegyező DNS szakasz alapján történik a hibajavítás, amit felhasználhatunk precíz géneditálásra is, amennyiben Cas fehérjén és guide RNS-en kívül egy donor DNS-t is bejuttatunk a sejtekbe, ami homológ szakaszokon kívül a kívánt módosításokat is tartalmazza. Ez a javítási útvonal azonban emlőssejtekben kevésbe domináns az NHEJ-hez képest, így nem mindig kivitelezhető a jó klónok előállítása.
Bár léteznek olyan módszerek, amelyekkel dúsítani lehet a megfelelő módosításokat tartalmazó sejteket, olyan megoldás még nem létezik, ami közvetlen összekapcsolná a HR megtörténtét egy markerral.
Célunk egy olyan módszer kifejlesztése, ami lehetővé teszi az editált sejtek fluoreszcencián alapuló sortolását, ezáltal megkönnyíti a jó klónok megtalálását, és jelentősen lecsökkenti a szekvenálás munkaigényét.
szerző
-
Tóth Péter
Biomérnöki alapképzési szak, nappali BSC
alapképzés (BA/BSc)
konzulensek
-
Dr. Welker Ervin
Tudományos tanácsadó, MTA TTK enzimológia (külső) -
Dr. Hajdinák Péter
Egyetemi adjunktus, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék
