Affinitás kromatográfiai hordozók fejlesztése fehérjék szelektív elválasztására
TDK munkám során rögzített új fémion tartalmú affiniás kromatográfiai hordozókat (Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC) fejlesztettünk ki, amelyek segítségével lehetséges a rekombinánsan előállított fehérjék tisztítása. Az IMAC technológia azon alapszik, hogy a fehérjét az N- vagy C-terminálisán egy fúziós „címkével” látják el géntechnológiai módszerekkel, aminek segítségével a rekombináns fehérje affinitás kromatográfiával egyszerűen elválasztható. A legjobban elterjedt címke a láncvégekhez kapcsolt oligo-hisztidin (His-Tag), ami reverzibilisen kötődik a hordozón kialakított fémkelátokhoz.
Célunk olyan segédanyagok előállítása volt, amellyel folyamatos üzemben megvalósítható a fermentációval előállított fehérjék szeparációja. Hordozóként a kutatócsoport által már széles körben használt, kitűnő mechanikai szilárdsággal, nagy fajlagos felülettel rendelkező és szerteágazóan módosítható szilikagéleket választottuk. A felületmódosításokat több lépésben valósítottuk meg, hogy a hordozóink tulajdonsága az alkalmazási terület kívánalmainak megfeleljen. A fejlesztés során célunk volt az is, hogy könnyen kivitelezhető és robosztus reakciókat építsünk be a technológiai folyamatba, a segédanyagok többször felhasználhatók és regenerálhatók, folyamatos üzemben alkalmazható legyenek, illetve kiküszöböljük a jelenleg kereskedelmi forgalomban kapható IMAC hordozók hátrányait úgy, mint a nehézkes tárolási körülmények, visszaforgathatóság, toxikus fémionok.
Az előállított hordozóink szoba körülmények között stabilan tárolhatók, gyors és hatékony technológiai lépések útján építjük fel őket és általánosan alkalmazhatók His-Tag-el ellátott célfehérjék tisztítására.
szerző
-
Illés Emese
gyógyszervegyész-mérnöki
nappali
konzulens
-
Dr. Poppe László
egyetemi tanár, Szerves Kémia és Technológia Tanszék
